1. 测定原理
*检测试剂盒是利用免疫学直接竞争法的原理，固相载体微孔板上包被有*蛋白偶联物，加入待测*标准品或样品溶液及*的抗体，包被在微孔板上的*蛋白偶联物和标准品或样品中的*竞争性地与抗体结合，形成抗原抗体复合物；洗涤后再加入二抗，洗涤后加入显色剂，将无色的显色剂转化为蓝色的产物；加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色；在450nm波长进行检测，样品中的*浓度与吸收光强度成反比。
2. 试剂盒组成
（1）96孔酶标板： 1块 96 T/8孔
（2）标准品： 0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1ppb（1mL/瓶）
（3）抗体工作液： 1瓶（7mL）
（3） 酶标记物： 1瓶（12mL）
（4）底物缓冲液： 1瓶（7mL）
（5）底物液： 1瓶（7mL）
（6）终止液： 1瓶（7mL）
（7）20倍浓缩洗涤液： 1瓶（50mL）， 加蒸馏水稀释到1000 mL
（8）复溶液（浓缩）： 1瓶（15ml），加蒸馏水稀释至300ml
（9）使用说明书 1 份
（10）封板膜： 2张
（11）封口袋： 1 个
3. 注意事项
（1）终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
（2）不要使用过了有效日期的*检测试剂盒，不同批次、不同试剂盒之间的试剂等内容不可混用，以免降低灵敏度。
（3）0标准品的A450nm<0.6时，表示试剂可能变质，请勿使用。
（4）显色剂变蓝，表明已变质，请勿使用。
4. 储存条件
（1） 2-8℃保存，切勿冷冻。
（2）将不用的酶标板放进带干燥剂的封口袋中密封保存。
（3） 酶标记物和显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
5. 样品处理
（1） 尿样
取新鲜干净的尿样50 μL进行分析。
（2）组织、肌肉样品 （稀释倍数为1）
a．取1g±0.05 g组织，加入6 mL乙腈，振荡10 min,室温4000 r/min以上离心10 min；
b．取全部上清置于离心管中；在残渣中再加入4ml乙腈，振荡10 min，室温4000 r/min以上离心10min。
c．混合两次上清液，振荡1min，于50 ℃下氮气或室温下吹风机吹干；
d．加入1 mL配好的复溶液，取50 μL进行分析。
6. 免疫分析时试剂的准备
（1） 注意事项
a) 使用之前将所有试剂回升至室温。
b) 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
c) 在使用中不要让微孔干燥。
d) 在EIA分析中的重复性，很大程度上取决于洗板的*性，仔细按照*的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。
e) 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜盖住微孔板。
（2） 浓缩洗涤液使用前应根据所需量进行20倍稀释，即按1 mL浓缩洗涤液加入19 mL蒸馏水的比例进行稀释。
（3） 复溶液为浓缩溶液，使用前应根据需要量进行20倍稀释，即按1 mL浓缩洗涤液加入19 mL蒸馏水的比例进行稀释。
7. 测定程序
（1） 将标准品、样品所需微孔板（均需2个平行试验）放在反应架上。
（2） 加入50 μL样品或标准品到微孔板中，再加入50 μL抗体工作液到微孔板中，充分振荡混匀，用盖板膜盖板后，37℃下反应30 min 。
（3） 弃去孔中液体，每孔注满稀释好的浓缩洗液，轻轻振荡，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复6次。
（4）加入100 μL酶标记物到微孔板中，用盖板膜盖板后，37℃下反应20 min 。
（5）弃去孔中液体，每孔注满稀释好的浓缩洗液，轻轻振荡，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复6次。
（6）加入50 μL底物液缓冲液，再加入50 μL底物液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后在37℃下暗处孵育10min。
（7）加入50 μL终止液到微孔板中，混合好在450 nm处测量吸光度值，必须在加入终止液后15分钟内读取光度值。
8. 测定技术指标
灵敏度：0.1ppb
半抑制浓度（IC50）：≤0.7 ppb
标准曲线范围：0.1-8.1ppb
精确度：板内变异误差小于5%，板间变异误差小于10%
准确性（回收率）：尿液、组织、肌肉：100±20%
